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產(chǎn)品與服務(wù)
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產(chǎn)品與服務(wù)

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分子量測(cè)定

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> 技術(shù)簡(jiǎn)介

        鑒定蛋白質(zhì)的大小和純度最簡(jiǎn)單的辦法莫過于通過SDS-PAGE,但是SDS-PAGE只能測(cè)定蛋白質(zhì)表觀分子量,對(duì)于蛋白質(zhì)精確分子量的測(cè)定,只能通過MALDI-TOF質(zhì)譜法。該方法將蛋白質(zhì)分子離子化后通過質(zhì)量分析器對(duì)其質(zhì)荷比進(jìn)行分析,或進(jìn)一步通過算法得到樣品的精確分子量。

> 技術(shù)原理

        MALDI-TOF/TOF主要由兩部分組成:基質(zhì)輔助激光解吸電離離子源(MALDI)和飛行時(shí)間質(zhì)量分析器(TOF)。MALDI技術(shù)是將樣品均勻包埋在基質(zhì)中,基質(zhì)吸收激光提供的能量而蒸發(fā),攜帶部分樣品分子進(jìn)入氣相,并將一部分能量傳遞給樣品分子使其離子化。TOF的原理是離子在電場(chǎng)作用下加速通過飛行管道,根據(jù)到達(dá)檢測(cè)器的飛行時(shí)間不同先后被檢測(cè),即測(cè)定離子的質(zhì)荷比(m/z)與離子的飛行時(shí)間成正比。

 

 

> 技術(shù)優(yōu)勢(shì)

  可用于大規(guī)模數(shù)量樣本檢測(cè);

  不受樣本分子量大小的限制;

  高靈敏度、高準(zhǔn)確性

> 應(yīng)用領(lǐng)域

  蛋白分子量測(cè)定

> 技術(shù)路線

> 實(shí)驗(yàn)儀器

  5800 MALDI TOF/TOF™(AB SCIEX)

> 數(shù)據(jù)分析

  蛋白分子量測(cè)定結(jié)果

 

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未找到相應(yīng)參數(shù)組,請(qǐng)于后臺(tái)屬性模板中添加

> 研究案例

葡萄糖醛酸木聚糖酶同工酶的定性研究

K. Hayashi, et al. Lett Appl Microbiol. 1996, 22(4):293-8.

> 研究背景

  木聚糖不僅是細(xì)胞壁的重要結(jié)構(gòu),而且是商業(yè)化和生物質(zhì)轉(zhuǎn)化中的目標(biāo)聚合物。在玉米細(xì)胞壁中,由葡萄糖醛酸木聚糖酶釋放的木聚糖超過70%。早期研究顯示,葡萄糖醛酸木聚糖酶可能存在三種形式。本文基于葡萄糖醛酸木聚糖酶純化,對(duì)該酶及其同工酶進(jìn)行N端測(cè)序、分子量和等電點(diǎn)(PI)測(cè)定以及比較GX1和GX2兩種亞型的動(dòng)力學(xué)參數(shù)和理化性質(zhì)。

> 研究結(jié)果

  測(cè)序結(jié)果顯示GX1亞型木聚糖酶的序列為ASDVTVNVSAEKQVIRGFGGMNHPA WVGDL TAAQR ETAFG NGQNQLGFTI,而GX2亞型的前37位序列與GX1一致。此外,研究者將蛋白酶SDS-PAGE分離后進(jìn)行MALDI-TOF分子量測(cè)定,其中GX1的分子量為44360+100,GX2的分子量為44370+100。毛細(xì)管電泳結(jié)果顯示,GX1的PI為9.0,GX2的PI為9.1。

 

  理化性質(zhì)比較結(jié)果顯示,兩種亞型在40 ℃,PH6.5條件下活性穩(wěn)定,當(dāng)溫度超過55 ℃則酶活性下降。而兩種酶的最適PH范圍有所差別,其中GX1在PH7-8.5條件下活性穩(wěn)定,GX2在PH5-7條件下穩(wěn)定。

 

 

樣本類型

送樣量

純化后的蛋白溶液或干粉

純度> 90%,蛋白量>50 μg,濃度>1 μg/μL
揮發(fā)性無機(jī)鹽<20 mM,不揮發(fā)性無機(jī)鹽<5 mM

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北京博奧麥斯科技有限公司

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